différence entre PCR/Clonage moléculaire

[charlottedewever]

salut, je comprends pas trop la différence entre la PCR (qui permet d'amplifier) et le clonage qui permet aussi d'amplifier ? Pourquoi faire un clonage quand il y a la PCR ? merciiiii

[Stabilo'drey]

Et coucou !

Le rôle de la PCR c’est bien de réaliser une amplification.
Quand on fait un clonage on a aussi une amplification mais c’est pas son but 1er.

Je te met le lien de ce post pour que tu comprenne mieux le principe du clonage et pourquoi on en fait un :
https://www.carabinsnicois.fr/phpbb/vie ... 7&t=161787

Dis moi si c’est plus clair pour toi !

[charlottedewever]

yes merci bcp !!
juste je comprends pas comment la PCR peut faire les deux allèles en même temps ? quand on fait les 3 processus (dénaturation, hybridation et élongation) c'est que sur l'ADN d'une seule chromatide nan ? ou ça c'est pour le clonage du coup ? merciii

[Stabilo'drey]

Quand on fait une extraction d'ADN, on ne prends pas qu'un seul brin. On va en avoir plusieurs et donc les 2 allèles vont être présentes. C'est cet ADN qu'on va mettre dans notre tube pour réaliser la PCR, donc il y a plusieurs brins à la base, mais pas suffisamment donc il faut quand même faire une amplification.

Ensuite oui les étapes se suivent sur 1 seul brin effectivement, c'est juste qu'il y a plusieurs brin qui réalisent une PCR en même temps.

[charlottedewever]

du coup on peut dire que la PCR peut amplifier tout le caryotype (donc ce qui comprend des Ks homologues avec des allèles différents) tandis que le clonage va venir sélectionner une séquence spécifique d'un seul K et d'un seul allèle. J'espère que c'est ça merciiii

[Stabilo'drey]

Alors non pas vraiment
Déjà on a parle de caryotype quand on analyse les chromosomes. Ici on analyse la séquence d'ADN c'est pas la même chose. T'aura le temps de le revoir avec les cours qui vont sortir après, mais on n'utilise pas les même techniques et ce ne sont pas les même maladies que l'on a.

Donc oui en soit la PCR peut amplifier tout le génome, mais ce n'est pas de ça dont il est question ici. La PCR va amplifier le fragment d'ADN qu'on lui donne. Et c'est peut être un tout petit fragment (comme dans le cas d'une recherche de mutation de l'achondroplasie), mais il y a aura toujours les 2 allèles présentes et mélangé ensemble, ce qui peut nous embêter. Le clonage nous permet de séparer ces 2 allèles pour qu'on puisse les séquencer indépendamment sans qu'ils soit mélangé. Mais la séquence n'est pas plus spécifique dans le clonage que dans la PCR, c'est les même séquences, juste bien séparer dans le clonage alors que mélanger dans la PCR classique (attention d'ailleurs parce que dans la NGS on fait direct une PCR clonale, qui nous évite de passer par l'étape du clonage moléculaire).

Je pense que tu t'embrouille un peu avec le vocabulaire :
Caryotype = visualisation des chromosomes = on va avoir des maladies chromosomiques = on parle de cytogénétique
Séquence d'ADN = à l'échelle du nucléotide = on va avoir des maladies géniques = on parle de génétique moléculaire

Allèles = version alternative d'un même gène
Chromosome Homologues = chromosome d'une même paire, ils contiennent les même gène, mais il peuvent avoir différents allèles
Chromatide soeur = séquences strictement identique car créer par la réplication, ici on a pas de notion d'allèle, on est sur le même chromosomes, les 2 séquences sont exactement les même

Est ce que tu comprends mieux ?

[charlottedewever]

okayyy mercii