double coloration PI/ hoesct

[dyanabol]

salut, j'ai compris le mécanisme globale de la double coloration mais je vois juste pas l'utilité du colorant Hoechst parce qu'il fixe toutes les cellules, pourquoi ne pas juste utiliser le PI qui lui ne fixe que les cellules nécrotiques ?
Merci bieng

[Houcytoplasme]

Salut,

Je tient déjà a m'excuser pour cette réponse hyper tardive, j'ai enfin trouvé le temps de répondre à ton post

Merci d'avoir posé cette question parce que je viens de me rendre compte qu'il y'avait une ERRATA sur ma fiche et les anciennes Ronéos concernant la fixation du Hoechst.

En effet, je le rappelle ici, mais les Cellules normales sont en fait INCAPABLES de fixer le Hoechst +++.

Pour répondre maintenant à ta question, le colorant Hoechst ne fixe donc pas toutes les cellules (je pense que tu as du sûrement y penser et tu as bien fait ). Si l'on veut distinguer les cellules apoptotiques et nécrotiques et que les cellules "normales" s'incruste aussi ça ne vas pas vraiment nous aider.

D'autant plus qu'après la réalisation de la cytométrie, si l'on introduit pas le Hoechst, on ne pourra pas distinguer les cellules apoptotiques ou nécrotiques au microscope a fluorescence. C'est pour cela que l'on ajoute le PI afin de pouvoir visualiser et distinguer les cellules Apoptotiques ou Nécrotiques potentiellement présentes dans notre culture cellulaire.

Imaginons par exemple que tu cherche des cellules apoptotiques présente parmi ta culture cellulaire, si ton colorant Hoechst n'est pas présent, tu ne pourrai pas le faire, comme le PI ne fixerai que les cellules nécrotiques et que les cellules apoptotiques ne seraient pas apparentes.

Imaginons cette fois ci que tu cherche des cellules nécrotiques, eh bien, sans PI tu ne pourrais pas faire la différence entre les cellules apoptotiques et nécrotiques, d'où l'intêret d'utiliser celui-ci.

J'espère que c'est plus clair, N'hésite pas si tu as plus de questions et n'oublie pas de passer le post en résolu

La biocell t'envoie plein de