DM électrophorese QCM 5

[Marionf20]

Coucou,

Je n'arrive pas trop à comprendre comment on peut trouver l'enzyme de restriction:

Vous suspectez la présence de la mutation c.675 A>C du gène XYZ au sein d’une famille. Ci-dessous la séquence nucléotidique qui encadre cette mutation sur un allèle sain avec la position 675 soulignée :
TATCGCTACCGATAAGTCGT
Vous réalisez une PCR sur un fragment s’ADN qui encadre la mutation pour pouvoir effectuer une digestion enzymatique par la suite. Vous disposez de 4 enzymes de restrictions différentes :

• BamHI, site de restriction CCGAT
• EcoRIII, site de restriction CTAA
• SmapII, site de restriction CTACCGC
• HapaI, site de restriction AAGTC

Mercii

[Généthilde]

Salut !
Pour trouver les enzymes que tu vas pouvoir utiliser il faut que tu en trouves une qui coupe à un endroit opportun. Par exemple si tu utilises la dernier, le site de coupure est présent dans la séquence donc il y aura coupure mais tu ne pourras pas différencier les séquences avec ou sans mutation car ce n'est pas à cet endroit que la mutation est présente donc l'enzyme coupera dans tous les cas
C'est bon pour toi ?

[Marionf20]

Non, désolé j'ai un peu de mal à voir qui est la bonne.. est ce que il faut choisir la même séquence ou la même séquence avec la nucléotide qui change...

[Généthilde]

En fait il faut que tu choisisse une séquence qui te montre qui va pouvoir faire la différence si la mutation est présente. Si tu utilise BamHI qui coupe la séquence CCGAT alors elle va couper le fragment puisque tu peux retrouver cette séquence dedans et elle le coupera quand la mutation ne sera pas présente.
Si tu utilises l'enzyme EcoRI qui coupe pour CTAA tu vas pouvoir retrouver cette séquence si la mutation est présente puisque le A devient un C. Donc si tu utilises cette enzyme et qu'il y a une coupure alors la mutation est présente.
Est ce que tu as compris ? SI c'est pas bon n'hésites pas

[Marionf20]

OUII c'est bon mercii