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PCR en temps réel


PCR en temps réel

Messagepar sisouuu » 21 Nov 2022, 08:10

Coucouu,

je ne comprend pas trop le terme de "produit de PCR" car dans le cours on nous dit que l'intensité de fluorescence de la SYBR green est proprotionnelle a la quantité de produit PCR synthétisé mais aussi que l'intensité de fluorescence est identique quelque soit la quantité d'ADN de départ


Merci d'avance <3
sisouuu
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Re: PCR en temps réel

Messagepar Biomol'ka » 24 Nov 2022, 15:28

Coucouu !

La phrase "L’intensité de la fluorescence est proportionnelle à la quantité de produit PCR synthétisé" est une traduction de cette courbe :
Capture.PNG


D'où est issue la fluorescence ? :arrow: Le SYBR Green est un agent intercalant qui a la possibilité de fluorescer dès qu'il s'intercale entre deux brins d'ADN. Et donc, au fur et à mesure que les cycles se succèdent, tu as de plus en plus d'ADN produit :arrow: de plus en plus d'intercalation de SYBR Green :arrow: de plus en plus de fluorescence.

Ensuite, pour la deuxième partie de ta question, regardons ce schéma :
Capture.PNG


Tu vois que quelle que soit la quantité d'ADN de départ, ton système sera toujours saturé au bout de n cycles et il ne formera pas plus de produits PCR. Autrement dit, quelle que soit la quantité d'ADN de départ, la fluorescence finale sera toujours la même mais elle va être atteinte plus ou moins tôt en fonction de la quantité d'ADN de départ (plus tu as de l'ADN au départ, moins tu auras besoin de cycles pour arriver à la fluorescence finale qui reste la même).

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