Petites questions

[Eliiii]

Salut !

1) Est ce que l'on peut dire que la protéinase K peut dégrader les GR ou biens est ce qu'ils le sont déjà tous par la solution hypotonique ?

2) pour l'extraction d'ARN, on peut simplement inhiber les RNAses endogènes ?

3) dans le nothern blot y a t'il un champ électrique ? Car pour le western blot il y a écrit "la migration se fait dans un champ électrique et non par capillarité"

4) je ne comprends pas pourquoi dans la vérification par séquencage on peut différentier nos 2 populations, par quel moyen ?

Merci d'avance

[Chob]

Salut !

1/ Seule la solution hypotonique a pour but de lyser les GR. La protéinase K est une enzyme (-ase) qui lyse les protéines (protéin-), pas les GR !

2/ Oui on lyse les RNases endogènes car elles attaquent l'ARN

3/ Que ce soit sur gel (d'agarose ou d'acrylamide) ou sur capillaire, il y a quand même un champ électrique : c'est juste le support (gel ou polymère) qui change
viewtopic.php?f=322&t=36035 , dernier paragraphe

4/ Ce n'est pas le séquençage qui permet de séparer tes 2 populations d'allèles, mais le clonage que tu fais juste avant ! Puis c'est une fois que tu as tes 2 populations d'allèles séparés que tu vas faire le séquençage pour ces deux : tu obtiens donc le séquençage d'une des 2 allèles, le séquençage de l'autre allèle et ensuite tu fais la comparaison entre les deux.

[Eliiii]

Merci merci