Clonage/PCR/Restriction

[ElDupon]

Bonjour bonjour,

De ce que j'ai pu comprendre, dans le cas d'une pathologie dont les mutations peuvent être nombreuses et méconnues, on fait intervenir le clonage moléculaire suite à la PCR/intervention d'enzymes de restriction/séquençage afin d'obtenir des copies pures et identiques d'une séquence donnée d'ADN, donc séparer les différentes séquences.

Par la suite, des tests suivent le clonage moléculaire pour s'assurer de l'obtention d'un ADN recombinant pur et en grande quantité dont l'utilisation d'enzymes des restriction pour vérifier la présence d'un insert.

Cependant, je vois écrit, p.2 ronéo 2 :

" Soit on a une pathologie dont on suspecte un gène responsable, de taille plus ou moins grande, mais les mutations ne sont pas connues : on va screener / séquencer le gène en entier. Dans ce cas là, vu qu'on ne connait pas les mutations responsables, on ne peut pas utiliser d'enzyme de restriction donc on ne va pas utiliser la PCR RFLP ".

N'y a t-il pas contradiction ?

Sauf si je n'ai rien saisi.

[Chob]

Salut !

Imagine : un patient vient te voir et d'après ses signes cliniques, tu supposes que ton patient est atteint d'une certaine maladie génétique M, dont tu connais la ou les mutations qui la provoquent.

Sauf que supposer ça ne suffit pas : tu vas donc faire toutes les techniques de BM et notamment le séquençage pour affirmer le diagnostic.
Donc tu fais tout le tralala : PCR, enzymes de restriction... et séquençage, et là tu t'aperçois que ton séquençage est illisible. Tu n'obtiens pas ce qui était prévu, autrement dit ton patient n'est pas atteint de la maladie M mais d'une autre maladie, peut-être inconnue.(là j'invente une histoire hein !)
Du coup t'enchaînes avec le clonage moléculaire , et tu connais la suite.

Après, peut être que parfois on passe "directement" au clonage !

Enfait dans la plupart des cas tu passes d'abord par une étape de suspicion de maladie : dans ce cas là tu vérifies, tu veux affirmer la supposition que tu as faite cliniquement.

Je pense pas que ça arrive très souvent d'avoir un patient devant soi avec des signes cliniques étranges ou bizarrement associés, et que tu te dises "ah ben lui, il a une nouvelle maladie encore inconnue !" ^^.
Nan, d'abord tu fais une hypothèse en te disant qu'il a peut être une forme "particulière" de la maladie M par exemple. Donc tu cherches la ou les mutations de la maladie M : soit il les a, soit non et tu fais le clonage moléculaire, ou tu cherches ailleurs sur le génome ...

Tu comprends l'idée ?

[ElDupon]

Donc en fonction du cas qui nous est présenté :

On peut directement entamer une amplification par PCR, séquençage... et si les choses se compliquent, on poursuit alors avec le clonage moléculaire et son tralala.

On entame directement le clonage moléculaire.

Est-ce cela ?