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[Résolu] 3 questions de rien du tt


[Résolu] 3 questions de rien du tt

Messagepar Léa * » 30 Avr 2013, 21:19

Bonjour, voila j'ai 3 petites question très simple mais qui me prennent la tête (un peu) :question:
1- Le Northern blot et Western Blot se font-ils bien en 4 étapes? pck dans le cours j'en ai compté 3 mais j'avais vu ca dans les annatut..
2- La migration électrophorétique se fait-elle pour l'ADN oui mais aussi pour l'ARN ?
3- L'insertion de l'insert dans le vecteur se fait-elle bien en 3 étapes?

Voila merci :)
Dernière édition par Léa * le 01 Mai 2013, 11:16, édité 1 fois.
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Re: 3 questions de rien du tt

Messagepar Chob » 01 Mai 2013, 10:13

Salut !

Bon déjà personnellement je trouve que certaines questions du style "en combien d'étapes .." sont beaucoup trop vagues ..
Comme je l'ai déjà dit dans un autre post, ça dépend à partir de quel moment, dans toute la manœuvre, tu commences à compter !

Bref,
1 - Il y a bien 4 étapes pour le western et le northern (diapo 79 et 84)
2 - Oui tu peux faire migrer ton ARN par migration électrophorétique sur gel d'agarose (dénaturant) : c'est la deuxième étape du northern blot !
3 - Les étapes vont différer selon si tu as utilisé une enzyme qui coupe à bouts francs (diapo 47 : étape supp' de déphosphorylation) ou à bouts cohésifs (étape supp' d'hybridation avant la ligation) ou si tu as utilisé 2 enzymes différentes pour l'insert et le vecteur (diapo 49 : étape supp' avec une nucléase ou Klenow)
Donc oui on pourrait dire 3 étapes en comptant 1: digestion enzymatique / 2: étape entre parenthèse / 3: ligation
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Re: 3 questions de rien du tt

Messagepar Léa * » 01 Mai 2013, 11:16

D'accord merci! :)
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