Clonage et enzymes de restrictions

[Pitt-choun]

Bonjour,

Je n'ai pas trouvé de précédents post là-dessus, j’espère que j'ai assez bien cherché.
Bref, je voudrais juste une petite précision si possible... Dans le clonage moléculaire, quand on prépare le plasmide et l'insert, il est dit ( ronéo 1 p15 ) '' les deux vont être digérés indépendamment par une enzyme de restriction ''. Je voudrais juste être sûr d'avoir compris : c'est bien la MÊME enzyme de restriction qui coupe ET le plasmide ET l'insert ?

Si oui, quand ensuite ( toujours ronéo 1 p15 ) on dit qu'on peut utiliser une combinaison de plusieurs enzymes ce sera la même combinaison pour le plasmide et l'insert non?

Désolé si c'est basique comme question mais je me suis embrouillé un max la dessus, allez savoir pourquoi...

Merci d'avance

[Chob]

Salut !

Oui voilà, le tout c'est d'avoir leurs extrémités complémentaires entre elles !

soit tu trouves une même enzyme qui va pouvoir couper 1 fois le vecteur ET 2 fois l'ADN pour donner un insert avec des extrémités qui seront donc complémentaires à celle du vecteur (si coupure à bouts cohésifs)

soit tu ne trouves pas une même enzyme qui puisse couper 1 fois le vecteur ET 2 fois l'ADN : tu vas donc en utiliser 2, et ces 2 vont couper chacun l'insert et le vecteur de manière à ce qu'on est aussi des extrémités complémentaires, différentes des 2 cotés.


Mmmmh .. j'arrive pas à être claire .. C'est compris ou .. ? ^^

[Pitt-choun]

Oui c'est parfait merci beaucoup