DM n°2 - QCM 7

[Crashtest]

Holà !

Alors en fait je crois que j'ai un gros soucis de compréhension sur cet item (on parle de la Transcriptase inverse):

Une fois son action finie, on obtient un hybride ADN : ARN

Ce que je comprend: c'est qu'une fois l'action de l'enzyme fini on obtient un brin d'ARN ?
♣ Alors je m'emmêle un peu les pinceaux, parce qu'on est d'accord que la Transcriptase Inverse donne un brin d'ADN à partir d'une matrice ARN ? A mon avis j'arrive pas bien a cerner comment comprendre cet item haha

Merci de m'éclairer ^^

[Chob]

Salut !

Enfait tu utilises la Reverse Transcriptase quand tu veux amplifier par clonage une region d'ARN.
Le problème c'est que tu ne peux pas directement inséré l'ARN dans ton vecteur. Tu vas donc devoir transformé la région d'ARN en ADN, parce que par contre tu peux inséré une région d'ADN double brin dans un vecteur.
Du coup c'est la que la Reverse Transcriptase intervient :
1/ Tu pars d'une région d'ARN simple brin
2/ Tu vas utiliser la Reverse Transcriptase : elle va synthétiser un brin d'ADN complémentaire à cette région d'ARN (la région d'ARN est donc la matrice, et comme toute polymérase, la Reverse Transcriptase va synthétiser un brin d'ADN à partir d'amorces)
3/ Tu obtiens une molécule double brin, avec un "mélange" ARN (la matrice) / ADNc : c'est ce qu'on appelle un hybride ADN : ARN
4/ Tu vas ensuite dégrader ton brin d'ARN, car même si tu as une molécule double brin avec l'ADNc associé, tu ne vas pas pouvoir l'inséré dans ton vecteur (ya toujours de l'ARN puis tu as une molécule double brin "batarde" ^^ )
parfait, il existe l'enzyme RNase H qui a la capacité de dégrader uniquement l'ARN lorsqu'il fait partit d'un hybride ARN : ADN
5/ A ce stade, tu as du coup une molécule d'ADN simple brin (ADNc)
6/ Tu vas amplifier l'ADNc par PCR afin de l'obtenir en grande quantité et en version double brin
7/ Tu vas ainsi pouvoir intégrer la molécule d'ADN double brin dans ton vecteur

[Crashtest]

Super, merci pour toute l'explication

Have a nice day !