Annale 2015 bis

[elea.crn]

Salut !

En cherchant l'explication d'une correction je suis tombée sur ce post, et suis, comme la dernière personne à avoir répondu, toujours perplexe face à la réponse apportée
https://www.carabinsnicois.fr/phpbb/viewtopic.php?f=2079&t=152375&p=719641#p719641

Les primers du séquençage ne devraient-ils donc pas être complémentaires - et non identiques -, de ceux utilisés en PCR ?? Peut-être n'ai-je rien compris mais s'ils doivent d'hybrider à eux pour séquencer, je vois pas comment deux primers identiques peuvent le faire ?

Merci !!

- aussi, pourquoi dire "Les amorces utilisées pour le séquençage", alors qu'une seule est nécessaire ?
J'en profite pour faire suivre cette question d'une nouvelle car sa réponse pourrait potentiellement éclairer cette dernière : on est d'accord que les primers utilisés en séquençage NGS sont encore différents et ne rentrent pas du tout dans ce cas de "correspondance" (les brins étant encadrés par des adaptateurs, les primers doivent en être les complémentaires - rien à voir avec la PCR en somme).
Bon y'a trois questions alors qu'à la base j'en avais qu'une mais voilà

[Stabilo'drey]

Et bien le bonjouuur ! Je vais répondre à tes questions une par une !

Pour l'item : Les primers utilisés pour la PCR, et ceux utilisés pour le séquençage, peuvent être identiques

Oublie pas que la PCR c'est une simplement une amplification. A la fin d'une PCR on a exactement nos même brins de départ mais juste en bcp d'exemplaires. Quand on arrive à la fin on se retrouve toujours avec des brins sens et des brins reverse. Lors d'une PCR on a du coup 2 primeurs, une pour le brin sens et l'autre pour le brin reverse. L'amorce pour le brin sens utilisé dans la PCR est le même que celui utilisé dans le séquençage, l'amorce pour le brin reverse par contre n'est pas utilisé dans le séquençage.
L'item demande si les primers PEUVENT être identiques, et pas si c'est toujours le cas. Donc je pense aussi que l'item est vrai.

Oui dans le séquençage il y a 1 seul type d'amorce, mais je pense qu'on dit "Les amorces utilisées" parce qu'il y a plusieurs amorces du même type. C'est toujours la même amorce mais elle y est plusieurs fois.

Oui les primers utilisés en NGS ne sont pas les même. Tu as raison, les primers sont correspondent aux séquences complémentaires des adaptateurs, alors que dans le séquençage et la PCR les primers sont des séquences complémentaires à des nucléotides déjà présent sur l'ADN du patient.

Est ce que maintenant c'est bon pour toi ??

[elea.crn]

Salut !

Je réponds bien tard, désolée ; merci pour cette super réponse
La seule chose qui reste incomprise c'est cette histoire de "complémentaire" et non "identique" ; le primer utilisé dans le séquençage devrait être complémentaire du primer sens utilisé dans la PCR, et non "identique" (sinon il y aurait un problème de complémentarité de bases, non ?). D'ailleurs, pourquoi forcément le sens ?
Voilà, c'est la seule chose qui reste un peu floue :')

Encore merci

[Stabilo'drey]

Oublie pas que tu as pleins de cycles dans une PCR, on a pas juste une élongation et puis on passe au séquençage, on a plusieurs élongations.

Par exemple, on passe d'un brin sens à un brin reverse et puis on revient à un brin sens. Donc les brins qu'on va avoir dans le séquençage ont été présent dans la PCR et on du subir une élongation. On avait exactement les même brins (pas uniquement complémentaires) donc on utilise les même primers.

Est ce que c'est mieux ?