Famille B : Hypothèses - PCR + Séquençage

[Xytilis]

Bonsoir !

J'ai pas très bien compris le second paragraphe de la partie a) Famille B : Hypothèses à la p.9

On dit qu'on fait 7 PCR différentes pour seulement amplifier les régions codantes. Ca j'ai compris

Puis on nous dit grosso modo qu'on les (les régions codantes, les exons) "encadre largement puisqu'on choisi d'utiliser des amorces situées de part et d'autres des exons". Alors là j'ai une question de visualisation.
Quand on dit que les amorces sont de part et d'autre des exons, je suppose que ce n'est pas entre chaque exon pour qu'ils soient un a un encadré mais plutôt un avant l'exon 1 et un autre en aval après l'exon 8 ?

Ma deuxième question concerne le fait qu'on amplifie les jonctions exon/intron.
Comment est-ce que c'est possible ? Si on veut amplifier cette région il ne faudrait que les introns soient présents dans les (7) amplifications PCR qu'on réalise ? Or on a réalisé des PCR qui ne prenaient en compte que les régions codantes...

Merci de m'éclaircir sur ces 2 points ! Coeur sur vous et la génétique

[Stabilo'drey]

Et bonchouuuuur !

Pour ta 1ère question :

Faut vraiment que tu comprennent que quand on dit qu'on fait 7 PCR différentes, c'est vraiment 7 PCR à part entière, ce sont des réactions différentes, dans des tubes différents. Donc dans chaque réaction on a besoin d'amorces différentes qui encadrent la partie voulu. Donc si, quand on dit que les amorces sont de part et d'autre des exons, on a bien des amorces entre chaque exons pour sélectionner uniquement les régions codantes.

Pour ta 2e question :

Alors oui on amplifie les jonctions intron/exons, pour être sure d'avoir bien tout notre exon en entier. Ce sont en effet des séquences non codantes alors qu'on l'on dit que l'on réalise une PCR uniquement sur les régions codantes.
En fait ce qu'on veut te faire comprendre c'est qu'on amplifie pas les introns +++ C'est ça la chose importante. Alors oui on va faire une PCR sur une toute petite partie non codante, mais c'est pas très important, cette mini séquences nous permet juste d'avoir les séquences codantes en entier. La partie qu'on aura amplifier et qui nous intéresse c'est quasiment que des régions codantes.

J'espère que j'ai été claire et que tu comprends mieux !
Merci bcpppp, gros coeur sur toi aussi !!!

[Xytilis]

J'ai bien fait de demander Merci pour la réponse ! C'est vraiment ultra clair

Du coup une dernière question sur ce cours

Dans la ronéo 5 p.11, on nous dit que la mère est porteuse du variant dans l'exon 6, or j'avais compris qu'on avait pas pu le détecter directement avant avec les 7 PCR parce que justement c'était l'intron 6 qui portait ce variant. Du coup je suis assez confuse...

Si tu peux m'expliquer pourquoi ce serait vraiment génial !

Merci et bonne soirée

[Stabilo'drey]

Mince c'est une errata
Tu as raison c'est bien une mutation présente dans l'intron 6 et pas l'exon 6, je vais aller noter ça merci bcp !
Et merci pour tes retours ça fait super plaisir !!

[Xytilis]

Génial je vais aller me le noter ! Merciii et bonne soirée