PCR RFLP et PCR

[Xytilis]

Et c'est encore moi, comment ça va ? haha

J'ai quelques questions :

- la PCR RFLP c'est la PCR + la digestion enzymatique ? ;
- la PCR c'est la PCR + le séquençage ?

Et du coup, j'arrive pas trop à comprendre ce qu'est la digestion enzymatique... Quand est-ce qu'on l'utilise et à quoi elle sert, enfin je sais qu'on l'utiliser pour cliver des séquences mais à part ça j'ai pas trop compris.

Merci ,j'espère que je vous saoule pas trop avec toutes mes questions x)

[Stabilo'drey]

Rebonjouur !

Alors oui PCR RFLP = PCR + digestion enzymatique
Par contre on a pas d'abréviation pour parler de la PCR suivi d'un séquençage. On dira juste PCR + séquençage.
Mais la PCR et le séquençage sont 2 choses bien distinctes à ne pas confondre :
PCR = amplification
Séquençage = lecture de la séquence

Pour la digestion enzymatique, si t'as compris que ça sert à cliver des séquences, t'as à peu près tout compris
En fait ça permet de cliver des séquences SPÉCIFIQUES. La digestion enzymatique est permise par des enzymes de restriction et c'est elles qui reconnaissent des séquences particulières.

Mais en quoi c'est utile ?
Et bien pour l'achondroplasie par exemple (on prendre juste le cas où on a une substitution A à la place de G) :
On a le brin sans mutation C TAC GGG
Et le brin avec mutation C TAC AGG

On cherche à savoir si il y a une mutation : on va donc utiliser des enzymes de restrictions, ici BfmI.
BfmI reconnait la séquence CTACAG, c'est à dire que si elle lit cette séquence elle la coupe, et si elle ne la voit pas elle ne coupe pas.
Or tu vois que cette séquence correspond à notre brin muté. Ça veut dire que sur l'enzyme de restriction voit un brin muté, alors elle reconnait la séquence, elle coupe et on se retrouve avec 2 brins. En revanche si le brin n'est pas muté, la séquence à reconnaitre n'est pas présente, alors l'enzyme ne coupera pas.

Au final c'est le nombre de brins qui nous donne le diagnostic :
1 brin l'enzyme n'a rien coupé pas de mutation
2 brins l'enzyme a coupé MUTATION

Est ce que ces notions sont plus claires pour toi et que tu comprends mieux l'utilité de la digestion enzymatique ?
Et tu nous saoule pas du tout ! Au contraire on est là pour ça !!

N'hésite pas si tu as d'autre question et sinon bonne journée !!

[Xytilis]

Hello merci pour la réponse

D'accord, donc impossible pour le prof de nous piéger sur PCR, PCR RFLP et PCR+Séquençage dans un QCM puisque ce sont bien des choses différentes ! C'est bon à savoir

Et merci pour l'explication de la digestion enzymatique ! C'est beaucoup plus clair maintenant. Encore une petite question du coup, est-ce que c'est ce même concept/mécanisme qu'on utilise pour un ADN recombinant ?

[Stabilo'drey]

Alors j'imagine que tu parles des cartes de restrictions.
Le principe est exactement le même, on utilise des enzymes de restriction, donc on reconnait une séquence que les enzymes vont ensuite découper, nous donnant plusieurs brins de tailles différentes.
La différence c'est qu'ici on ne veut pas poser un diagnostique en recherchant une mutation (comme dans l'achondroplasie), mais on utilise les enzymes pour regarder la tailles des brins et vérifier de l'insert est bien présent dans notre ADN recombinant.
Mais dans les 2 cas les enzymes font la même chose : reconnaissance d'une séquence spécifique + couper

Pour la PCR RFLP ou PCR + Séquençage ce qui est vraiment important pour la prof c'est de comprendre dans quel cas tu utilises chacun des 2.
Si on te dis que tu peut diagnostiquer un Syndrome de Wolfram avec une PCR RFLP il faudra le compter faux, et ça elle peut le faire tomber ++

C'est bon pour toi ??

[Xytilis]

Merciii c'est vraiment parfait !!!