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par **ShepardME** » 29 Mar 2018, 09:18

Salut,
L'item D : "il suffit de connaître les séquences de 18-20 nucléotides en amont OU en aval de la séquence à amplifier pour que la PCR se fasse" est compté juste, ce serait pas plutot 18 à 20 nucléotides en amont ET en aval ?
Merci

par **tamha06** » 30 Mar 2018, 12:29

+1111

par **Nom_de_Zeus!** » 31 Mar 2018, 10:26

Hey !

Non cet item est bien juste mais je comprends que cette formulation puisse vous induire en erreur et l'explication est un peu poussée par rapport au contenu du cours...

En fait la PCR utilise simultanément les deux brins d'ADN avec un primer sens pour l'un, et un primer anti-sens pour l'autre, on ne va pas utiliser un primer sens et un primer anti-sens ensemble, en même temps, sur le même brin !

La prof l'a glissé discrètement en cours, elle a dit que le séquençage n'utilise qu'un seul brin alors qu'on a besoin des deux pour la PCR (elle faisait justement allusion à ça) :glasses-nerdy:

On réplique donc un brin avec le primer sens, et l'autre brin avec le primer anti-sens.
Lors du cycle d'amplification suivant on inverse: le brin nouvellement synthétisé à partir d'un primer sens sert de matrice et on utilise cette fois-ci un primer anti-sens pour l'élongation, de telle sorte que le brin fils qui découlera de la synthèse correspondra bien au final à la portion située uniquement entre les amorces sens et anti-sens si on regarde la séquence globalement !

En gros lors du premier cycle on donne la borne de départ et on synthétise un premier brin.
Lors du deuxième cycle on repart de ce brin et on synthétise un deuxième brin en indiquant cette fois-ci la borne de fin, mais comme ce premier brin qui sert maintenant de matrice a déjà été défini avec la borne du début, on obtient au final "par somme" uniquement la portion qui nous intéresse, située entre les deux bornes !

Nos réactions sont à chaque fois croisées deux par deux et se font sur les deux brins en parallèle, simultanément ! :desire:

Même si au final on aura utilisé les deux amorces pour amplifier chacun des deux brins, on ne les utilisera qu'à la suite sur des brins différents, on définira à chaque cycle la borne en amont OU la borne en aval de la séquence, et on encadre au final la zone qui nous intéresse par somme en combinant les réactions des cycles successifs :rotfl:

C'est une notion assez compliquée qui ne tombera pas au concours, à votre place je compterais juste l'item dans les deux cas, qu'il y ait écrit vrai ou faux la prof ne vous piégera jamais sur ça !

Ça va ou je vous ai perdus ? :mrgreen: