Annatuts 2017 : Clonage moléculaire

[Claudia]

Salut
petite question par rapport à ce qcm :
" QCM 2 : A propos de la sélection des clones bactériens, donnez le(s) proposition(s) vrai(es) :
A) Etalée sur un gel rempli d’antibiotique, le seul espoir de survie de la bactérie est d’avoir intégré un ADN recombinant
B) L’insert s’insère à proximité du gène de la β-Galactosidase
C) La présence de l’insert aboutit à des colonies bleues
D) La présence de l’insert aboutit à des colonies blanches
E) Les propositions A, B, C et D sont fausses "

L'item A est compté juste. C'est juste pour savoir s'il ne fallait pas plutôt parler de vecteur tout court? L'ADN recombinant est formé par le vecteur et l'insert si je ne trompe pas, sauf qu'il fallait pas qu'au moins le plasmide ( avec ou sans insert ) soit intégré dans la bactérie pour qu'elle résiste à l'ampiciline? Je pensais qu'on parlait d'ADN recombinant uniquement par rapport à la sélection blanc/bleu. J'espère que c'est compréhensible
Merci d'avance

[Nom_de_Zeus!]

Hey !

Oula c'est pointilleux quand-même comme question

Ta définition d'un ADN recombinant est la bonne et tu as raison, la sélection par résistance à l'ampicilline (ou tout du moins à un antibiotique) permet uniquement de séparer les bactéries ayant intégré au moins un vecteur de celles n'ayant rien du tout, on ne peux pas savoir si à ce stade le vecteur contient en plus un insert et s'il forme donc ainsi un ADN recombinant (ça c'est effectivement le rôle de la sélection blanc / bleu que de faire la diffusion entre les deux)

Cependant le cas où le vecteur ne contient pas d'insert est une aberration, il n'est pas censé exister dans la théorie même si dans la pratique on le retrouvera toujours, dans l'idéal le seul moyen de survie des bactéries est d'intégrer un ADN recombinant, réfère-toi aux étapes précédentes intitulées "préparation d'un ADN recombinant"

Cette sélection étant dans la continuité directe de ces étapes, je prends plus cet item comme une généralité faisant appel au cas theorique, le cas idéal que l'on cherche à avoir !

Tu n'es pas censée avoir de vecteur sans insert dans ton milieu réactionnel et c'est pour t'en assurer que tu fais une sélection blanc/bleu, la formulation des anciens tuteurs et certes peu rigoureuse, mais si la prof faisait un item de ce genre ils ne faudrait pas non plus le compter faux ce n'est par le genre de pièges qu'elle ferait...

À la limite elle pourrait te dire que la sélection à l'ampicilline permet de sélectionner les bactéries ayant intégré un insert dans leur vecteur ce qui est faux, mais le terme ADN recombinant est peu utilisé en qcm, même si la définition est très stricte la prof préféra toujours parler de vecteur avec insert pour paraître plus explicite (même si le fait de parler directement d'ADN recombinant devrait déjà être explicite je suis d'accord

Enfin retiens que de manière générale, dans la théorie (dans un monde de bisounours où tout va comme on veut) le seul moyen de survit de la bactérie est d'avoir intégré un ADN recombinant

[Claudia]

J'avoue que je suis allée chercher un peu trop loin mais c'était pour être sure
Merci pour ta réponse, c'était très clair ! Bonne journée