Hey !
Parce que Pvu II coupe le fragment défini par Pvu I - Pvu I
Tu veux faire 4700 - 1200 = 3500 mais ça n'a aucun intérêt vu que les seuls calculs qu'on doit faire sont ceux des plus petits bouts qu'on va générer au total (on cherche à calculer la taille des plus petits fragments qu'on obtiendra au final compte tenu des enzymes utilisées).
Or ton fragment de 3500 pb va être coupé en deux par Pvu II en deux fragments de 4700 - 2500 = 2200 pb et 2500 - 1200 = 1300 pb (on remarque que 1300 + 2200 = 3500 donc on ne sait pas trompés)
Sur une électrophorèse tu ne verras jamais de fragment à 3500 pb parce qu'il va être coupé par Pvu II, et comme tu as déjà calculé la taille des deux petits bouts qui le composent, si tu calcules en plus l'équivalent de leur somme tu vas ajouter 3500 pb en plus que tu auras comptées deux fois mais de deux façons différentes et ça va fausser tous tes calculs
Le but n'est pas de calculer la distance séparant tous tes sites de coupure, on veut calculer la distance séparant les sites de coupures qui se suivent immédiatement sur le "cercle" (le plasmide), pour ne par calculer la taille d' un bout et deux minutes après la manière dont il est recoupé, on aura comptabilisé la même portion deux fois et qui plus est comme elle est au final recoupée elle n'apparait pas sur l'électrophorèse "entière" car elle n'est correspond pas au plus petit fragment qu'on obtiendra au vu des enzymes utilisées, ce qu'ils rend le résultat faux
C'est bon ?