Roneo 2 p20

[lea.hu]

Salut!
Tout d’abord merci pour cette roneo, les 25 pages m’ont fait peur au début mais en fait elle est vraiment super agréable à faire

Ma petite question se porte sur le premier paragraphe du « G. Sequencage des fragments d'ADN pur" : on lit "maintenant que les Adn sont purifiés et isolés, on va pouvoir les amplifier et les sequencer individuellement" et aussi « on refait PCR-Seq »

Mais pour moi on avait pas besoin de les amplifier étant donné que les bacteries s'en étaient chargé?
Et du coup j’avais retenu l’annee dernière qu’on faisait directement le sequencage sans PCR..

merci davance

[Nom_de_Zeus!]

Hey !

Merci beaucoup pour la ronéo au moins je l'ai pas faite pour rien

Je te le dis dès le départ c'est un détail sans importance il ne faut pas s'accrocher à tous les mots du cours

Les bactéries amplifient en effet le matériel génétique en plus de purifier les produits PCR, mais si on est dans l'incapacité d'extraire le matériel de plusieurs bactéries de la même colonie pour une raison quelconque on peut très bien se contenter de réamplifier l'insert contenu par une seule bactérie !

De façon générale on peut préférer amplifier par PCR le matériel génétique après l'avoir extrait d'une seule bactérie plutôt que de faire plusieurs extractions, c'est plus simple, et n'oublie pas que le but premier du clonage moléculaire est de séparer les allèles. L' amplification est plus une conséquence qu'un vrai objectif du clonage, mais néanmoins nécessaire pour laisser les bactéries se développer afin de voir lesquelles sont résistantes à l'ampicilline et lesquelles gardent une coloration blanche signant la présence d'un insert

Retiens que les deux options sont possibles, à savoir la réalisation de plusieurs extractions ou une amplification PCR après une seule extraction mais ça n'a vraiment aucune importance tu peux effectivement faire directement un séquençage

[lea.hu]

Ça marche!! Merci pour ta réponse complète et rapide