Clonage moléculaire

[sansa]

Salut !

J'ai un petit soucis on dit que lors du clonage moléculaire on ne peut distinguer l'allèle paternel de celui maternel qu'à l'étape de séquençage mais avec la carte de restriction on peut d'emblée les différencier non ? Vu que les ADNc ne font pas la même taille à cause du variant d'épissage !

On aura des vecteurs n'ayant pas intégré l'insert, des vecteurs ayant intégré un insert plus long (allèle maternel mais dont on ne connait toujours pas la séquence) et des vecteurs ayant intégré un insert de taille normale (allèle paternel)

[Nom_de_Zeus!]

Hey !

Pas vraiment, la carte de restriction peut te dire si le vecteur contient bien un insert et le cas échéant quelle taille il fait

Dans l'absolu on sait quelle taille est supposé faire notre produit d'amplification et par comparaison avec les résultats de la carte de restriction on doit pouvoir déterminer si l'insert qu'on a est ou pas un variant d'épissage du fait de sa taille, et a fortiori s'il correspond ou non à l'allèle paternel ou maternel

Mais on ne peut cependant pas en être sûr, parce que cette méthode est indirecte, or la seule méthode directe qui nous permet d'affirmer l'origine de l'insert est le séquençage (le séquençage est vraiment le gold standard en biologie moléculaire, c'est la seule façon d'être sûrs de ce qu'on fait)

Si tu veux la carte de restriction nous permet de suggérer l'origine de l'insert, le séquençage nous permet de l'affirmer mais c'est une nuance qui n'a pas vraiment d'intérêt dans le cadre du cours ne te pose pas trop de questions on ne te demandera pas ça...

La carte de restriction permet surtout de vérifier que la taille des inserts correspond à ce à quoi on peut s'attendre, mais le séquençage derrière nous permet de ne pas avoir de surprise (imagine que bim coïncidence et notre variant d'épissage à mal été amplifié on en a perdu un bout et il fait exactement la taille de l'autre allèle qui a juste subi une mutation ponctuelle, bon d'accord ça nous fait une grosse coïncidence mais dans l'absolu ça pourrait arriver c'est pour ça qu'on est sûrs de ce qu'on a qu'après le séquençage)

C'est bon ?

[sansa]

D'accord je vois !! On est rigoureux en biologie moléculaire !! Merci beaucoup !